配制实验室洁净区内毒素污染如何控制

细胞培养中

微生物案例

微生物检测实验室反馈：

使用热灭菌方式无法杀灭耐热菌，芽孢有残留。

导致培养基内毒素超标，将影响细胞培养效果和

微生物的培养效果。

细胞培养中，培养体系中可能会

受到内毒素的干扰。生物实验室中，

内毒素主要来自于各类配试剂所用的水、

各类培养基、血清及其他添加剂、实验器皿表面等。

内毒素更像是一个“隐形的杀手"，

日常实验中不显山不露水，

关键时刻很可能对实验结果造成“致命一击"，

导致结果出现偏差，影响实验稳定性。

收藏几类情况更应关注内毒素的影响：

1、养干细胞时，干细胞对内毒素非常敏感，如果血清中内毒素≥3EU/ml时，干细胞很容易死亡。

2、养免疫细胞时，过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子，抑制小鼠红细胞集落的形成等。

3、基因敲除相关的细胞实验，培养的细胞要尽可能保持其原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂，都会让后续的实验结果“失之毫厘，谬以千里"。在准备血清和其他试剂时，选择极低的内毒素（最好≤1EU/ml），对实验至关重要。

4、原代培养、杂交瘤融合、细胞转染，或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增，这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此，挑选更低的内毒素，是保证实验顺利的第一步。

5、实验室有些细胞，需要长期培养、长期冻存，或者经常复苏、经常培养的，血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康，都应该选用更低内毒素的血清，以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。

总之，控制培养基内毒素水平是保证实验结果准确和可靠的重要环节。通过选择合适的培养基成分、严格的无菌操作和合理的培养条件，以及定期检测培养基内毒素水平，可以最大限度地减少内毒素的产生，保证实验的可靠性。